Pengamatan terhadap darah inang yang terenfeksi virus dalam hal menentukan nilai parameter-parameter darah berupa Hb, Het, total protein plasma dan antibodi.
Metode Pembuatan Preparat Histologi :
1. Fiksasi
Larutan fiksasi yang digunakan adalah larutan formalin berpenyangga (pH 7.0).
Organ tubuh ikan yakni insang, daging dan ginjal dipisahkan dari tubuh, kemudian difiksasi dalam larutan formalin
Tabel 2. Komposisi Larutan Formalin berpenyangga fosfat (pH 7.0)
2. Dehidrasi dan Pengisian Paraffin
Spesiemen dibilas dengan air mengalir selama 15-30 menit untuk mencuci formalin.
Pindahkan jke dalam setiap larutan untuk dehidrasi dan pengisian paraffin. Larutan dan waktu perendaman yang digunakan sesuai tabel berikut :
Tabel 3. Larutan dan waktu perendaman dehidrasi dan embedding.
3. Bloking
Letakkan tempat jaringan (cetakan untuk blok paraffin) pada hot plate suhu 65oC dan isi dengan parafin yang telah dilelehkan. Letakkan organ pada dasar cetakan lalu taruh ke atas es untuk sedetik. Setelah itu letakkan kaset jaringan tersebut diatas cetakan. Tambahkan paraffin pada cetakan secukupnya. Blok parafin ini diletakkan pada papan es sampai parafin membeku. Kemudian lepaskan blok parafin dari cetakan lalu dipotong 2-3 mm dari tepi organ.
Pembuatan preparat sediaan
Blok parafin dipotong menggunakan mikrotom dengan ketebalan 4 µm. Jaringan yang dipotong melekat pada pisau mikrotom diambil dengan menggunakan kertas karton yang agak basah dan pindahkan ke wadah yang telah diisi air. Setelah itu, pindahkan ke atas kaca preparat dan letakkan dalam air hangat pada waterbath suhu 50oC selama 5 detik guna mengembangkan parafin. Letakkan kaca preparat tersebut diatas slide warmer suhu 55oC selama 1 jam untuk merekatkan jaringan tersebut pada kaca preparat.
a. Pewarnaan H & E
- Deparafinasi
1. Rendam dalam xylel-1 selama 10 menit
2. Rendam dalam xylel-2 selama 10 menit
3. Rendam dalam etanol absolut-1 selama 5 menit
4. Rendam dalam etanol absolut-2 selama 5 menit
5. Rendam dalam etanol 90% beberapa menit
6. Rendam dalam etanol 80% beberapa menit
7. Rendam dalam etanol 70% beberapa menit
8. Bilas dengan air mengalir selama 1 menit
9. Bilas dengan akuades selama beberapa detik
- Pewarnaan
1. Rendam dalam larutan hematoksilin selama 4 menit
2. Bilas dengan air mengalir selama 15 menit
3. Rendam dalam akuades selama 1 detik
4. Rendam dalam larutan eosin selama 5-6 menit
5. Rendam dengan akuades selama sedetik
- Dehidrasi
1. Rendam dalam etanol 70% selama 1 detik
2. Rendam dalam etanol 80% selama 1 detik
3. Rendam dalam etanol 90% selama beberapa detik
4. Rendam dalam etanol 95% selama 5 menit
5. Rendam dalam etanol absolut-1 selama 10 menit
6. Rendan dalam etanol absolut-2 selama 15 menit
- Penetrasi
1. Rendam dalam Xylel-1 selama 10 menit
2. Rendam dalam Xylel-2 selama 10 menit
3. Rendam dalam Xylel-3 selama 10 menit
- Penutupan jaringan
1. Ambil 1 tetes zat perekat (bioleit) dan letakkan ditengah-tengah kaca penutup segera letakkan penutup diatasnya.
2. Ambil preparat sediaan yang masih terendam dalam larutan xylel lalu segera letakkan penutup diatasnya.
3. Tekan keluar udara yang terdapat diantara kaca preparat dan kaca penutup dengan menggunakan forcep.
Posting Komentar
0Komentar